蛋白純化通用問(wèn)題（一）

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化通用問(wèn)題（一）。

1、層析柱的壽命多久，可以用多長(zhǎng)時(shí)間？
答：填料的使用次數(shù)依據(jù)不同的目的和條件而有差異。在使用過(guò)程中注意操作規(guī)范，定期清潔維護(hù)，可以使柱子保持*佳狀態(tài)。

2、柱子堵了，超壓如何處理？
答：可能原因：緩沖液或樣品未進(jìn)行過(guò)濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞；流速過(guò)快、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過(guò)高、溫度過(guò)低。
建議處理方法：首先將柱子卸下來(lái)，確定是系統(tǒng)還是柱子堵了。如果是柱子堵了：參考說(shuō)明書 CIP 操作進(jìn)行清潔；更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗。測(cè)定柱效或重復(fù)之前做過(guò)的樣品。后續(xù)，注意樣品前處理 ( 如核酸的去除、樣品緩沖液條件 ) 以及層析柱的日常維護(hù)。

3、如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染？
答：延長(zhǎng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來(lái)源是大腸桿菌裂解液，含有大量的DNA，可以用鏈霉素沉淀等方法，預(yù)先去除大量的 DNA。
通過(guò)層析方法去除：由于核酸帶負(fù)電，在陰離子柱上會(huì)結(jié)合或陽(yáng)離子柱上流穿，也可以有效去除核酸。
去除填料上結(jié)合的核酸：一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對(duì)核酸的去除效果較好（需要確認(rèn)填料是否可耐受NaOH）。如果核酸的吸附過(guò)強(qiáng)，會(huì)采用強(qiáng)烈的方法，3M 氯化鈉去除靠靜電吸附的核酸，然后用 1M 的氫氧化鈉分解核酸，之后再用 3M NaCl 清洗。
可用Heparin預(yù)裝柱或者填料：如果樣品是核酸結(jié)合蛋白，Heparin可結(jié)合核酸結(jié)合蛋白，從而使核酸流穿。貨號(hào)：17040601，17099801

4、柱子進(jìn)氣泡或跑干了，怎么辦？
答：可能的原因：環(huán)境溫度變化；緩沖液未經(jīng)過(guò)脫氣；層析柱連接系統(tǒng)或操作不當(dāng)。
建議處理方法：用大量脫氣去離子水或 20% 乙醇反向高速?zèng)_洗層析柱，直到小氣泡被帶出 ( 沖洗過(guò)程建議在系統(tǒng)連接反壓閥之后進(jìn)行）。如果大量進(jìn)氣，建議重新裝柱。

5、不同樣品檢測(cè)的吸光度值？
答：蛋白樣品*大吸收值一般在 280 nm，核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ；多肽 215 nm ；多糖 206 nm。

6、柱子有色素如何去除？
答：色素性質(zhì)很復(fù)雜，可以根據(jù)填料的耐受情況，優(yōu)先嘗試NaOH 清洗，另外，也可以使用有機(jī)溶劑（如 30% 異丙醇或乙醇），*后再嘗試酸，如 0.01 M HCl（需要確認(rèn)填料耐受性）。如果去除不掉，可以定期把色素污染部分的填料去除。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于蛋白純化通用問(wèn)題（一）。
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